细胞为什么总是抱团生长?
是细胞污染了还是正常现象?
是消化不好了还是铺板有问题?抱团细胞越来越多,怎么样才能让细胞分开生长?
细胞为啥总是喜欢抱团?
1.细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。
2,细胞离心速度过大或时间太长。
3,消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!
4,状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态)。
5,传代后细胞铺板不均匀
细胞抱团了,要如何处理?
1,如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前,就用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落,就可以了!——最好不要吹打,对细胞性状和生长都不好。
2,如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。
3,如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。
总结
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
资料格式:
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